冷冻卵子的技术目前已经普遍应用在各种疗程，例如：卵巢功能较差，须多次取卵才有足够可用卵子之试管婴儿疗程 (合卵)、使用卵子库之受赠者及冷冻卵子预存生育力者。然而这些经冷冻保存的卵子在解冻后的存活率是否能够符合我们的期待？是否有方法可以提高解冻存活率？这些都是我们关心的问题。
 
此研究的目的为探讨注射破卵针 (hCG) 至取卵之时间间隔是否影响冷冻卵子之解冻存活率，为回溯性之研究，收集从 2011 年 1 月至 2016 年 5 月，来自 208 位个案共 1779 颗冷冻卵子，其中有 89 位个案的 82 颗卵子已进行解冻，再排除掉非第三天胚胎植入的 19 位，分析 70 位个案进行第三天胚胎植入的疗程结果。
 
取卵至进行显微受精之操作时间轴如下图：

表1. 为 89 位个案的特性及疗程结果

解冻卵子个案
解冻个案数	89
年龄	35.3±5.0
解冻卵子数	826
解冻存活率(%)	87.5 (723/826)
受精率(%)	83.0±19.0
第3天好胚胎率(%)	48.6±32.8
第3天胚胎植入个案数	70
植入胚胎颗数	3.0±0.9
怀孕率(%)	45.7 (32/70)
着床率(%)	23.9 (50/209)

上表可看出解冻卵子的存活率平均为 87.5%，怀孕率 45.7%，着床率 23.9%。
 
以上结果再细分为不同年龄层，如表2.

个案年龄	≦30	31~35	36~39	≧40
解冻个案数	19	30	22	18
年龄	29.0±1.2	33.1±1.5	37.5±1.1	42.7±2.5
解冻卵子数	263	244	207	121
解冻存活率 (%)	91.3a,b (240/263)	87.7 (214/244)	85.5a  (177/207)	83.5b  (101/121)
受精率 (%)	80.4±14.5	81.8±21.8	84.4±21.1	87.0±15.9
第3天好胚胎率 (%)	52.3±30.4	46.8±35.2	46.2±37.0	48.1±28.5
第3天胚胎植入个案数	15	24	17	14
植入胚胎颗数	3.3±0.7	2.9±1.0	3.0±1.1	3.0±0.8
怀孕率 (%)	46.7 (7/15)	66.7 (16/24)	47.1 (8/17)	7.1 (1/14)
着床率 (%)	20.0c,d (10/50)	42.0c,e (29/69)	25.0 (12/48)	2.4d,e (1/42)

 
a. p=0.048; b. p=0.024; c. p=0.012; d. p=0.010; e. p<0.001
上表可看出较年轻的卵子 (≤30岁) 之解冻存活率较佳 (91.3%)；31~35 岁之着床率较高(42.0%)，而 ≥40 岁使用解冻卵子的着床率较低 (2.4%)。各年龄层之受精率、D3 好胚胎率则无显著差异。
 
接着于同一年龄层中分析不同的注射破卵针 (hCG) 至取卵之时间间隔对于疗程结果是否有不同。
 
表 3. 为 ≤35 岁个案之结果：

注射破卵针 (hCG) 至取卵之时间间隔	<34小时	<34~35小时	≥35小时
解冻个案数	6	20	23
年龄 (mean±SD)	32.5±1.8	31.6±2.5	30.9±2.3
解冻卵子数	66	213	219
解冻存活率 (%)	78.8a,b (52/66)	92.0a (196/213)	90.0b (197/219)
受精率 (%)	78.5±26.0	85.2±16.7	78.5±19.5
第3天好胚胎率 (%)	32.0±25.8	41.9±31.9	59.5±33.8
第3天胚胎植入个案数	5	16	18
植入胚胎颗数	3.2±1.3	3.3±0.8	2.8±0.9
怀孕率 (%)	60.0 (3/5)	43.8 (7/16)	72.2 (13/18)
着床率(%)	43.8 (7/16)	19.2c (10/52)	43.1c (25/51)

 
a. p=0.003; b. p=0.016; c. p=0.009
在 ≤35 岁这个年龄层中，若注射破卵针至取卵之时间间隔 34 小时，其解冻存活率都可达到 90% 以上。
 
表4. 为 >35 岁个案之结果：

注射破卵针 (hCG) 至取卵之时间间隔	<34小时	34小时～35小时	≥35小时
解冻个案数	5	14	21
年龄 (mean±SD)	38.2±1.7	40.1±2.4	40.1±3.7
解冻卵子数	39	127	162
解冻存活率 (%)	74.4a (29/39)	81.1b (103/127)	90.1a,b (146/162)
受精率 (%)	85.7±20.2	83.3±16.9	86.3±20.6
第3天好胚胎率 (%)	55.8±37.6	52.6±29.7	43.5±34.3
第3天胚胎植入个案数	5	11	15
植入胚胎颗数	3.0±1.2	3.2±0.8	2.9±0.9
怀孕率 (%)	40.0 (2/5)	27.3 (3/11)	26.7 (4/15)
着床率 (%)	13.3 (2/15)	8.6 (3/35)	15.0 (6/40)

a. p=0.009; b. p=0.028
在 >35 岁这个年龄层中也得到同样的结果:若注射破卵针至取卵之时间间隔

而在相同的破卵针至取卵之时间间隔中，不同年龄的解冻存活率差异，如表5.

注射破卵针 (hCG) 至取卵之时间间隔	<34小时		34~35 小时		≥35小时
	≤35岁	>35岁	≤35岁	>35岁	≤35岁	>35岁
总解冻卵子数	66	39	213	127	219	162
存活率(%)	78.8 (52/66)	74.4 (29/39)	92.0a (196/213)	81.1a (103/127)	90.0 (197/219)	90.1 (146/167)

a. p=0.003
在破卵针至取卵之时间间隔 34~35 小时这组，可看出年龄较轻 (≤35岁) 解冻存活率会比较好。
 
在过去的实验中曾经发现不同成熟度的哺乳类卵子会有不同的水份、冷冻保护剂通透程度 (Le Gal F1, Gasqui P, Renard JP. 1994)，也许可以解释此研究之结果。
在此研究中我们可以得知，卵子的年龄及注射破卵针 (hCG) 至取卵之时间间隔会影响卵子之解冻存活率。
 
李孟儒 医师的分享
试管婴儿疗程中的每个时间点都非常重要，太早或太晚都有可能造成不尽理想的后果。一般来说，打完破卵针到取卵的最佳时间是 35~36 小时，取卵后 1~2小 时去除卵丘细胞，再过 1~2 小时显微授精或是冷冻卵子。卵子解冻之后则是 2~3 小时做显微受精。这些流程在数量少时可以从容不迫的完成，但是当数量变大时，一定要把工作分配好，才能顺利完成。一个成功的团队，是不管遇到任何情况，都能够维持一贯水平的成绩。送子鳥卵子解凍存活率維持超過9成的好成績，就是整個團隊共同努力的成果。
 
参考数据：

• 2016 TSRM, Effects of the time interval between human chorionic gonadotropin (hCG) priming and oocyte retrieval on the survival rates of vitrified/thawed oocytes. Chun-Chia Huang, Hsiu-Hui Chen, Chung-I Chen, Pei-Wen Lin, Tsung-Hsien Lee, Chien-Hong Chen, Li-Sheng Huang, Maw-Sheng Lee.
• Differential osmotic behavior of mammalian oocytes before and after maturation: a quantitative analysis using goat oocytes as a model.Le Gal F1, Gasqui P, Renard JP.Cryobiology. 1994 Apr;31(2):154-70.