早期胚胎培养，因為培养液的成分还不足以提供较多天数的体外培养，所以三天的体外培养后就进行植入是普遍的做法（D3 ET）。而胚胎培养液在经过一连串的发展，目前已经能够让培养天数延长，桑椹胚（Morula）至囊胚期（Blastocyst）植入的可行性，更是无庸置疑。
培养天数的延长让我们能更趋精准地挑出首选的胚胎，同时能降低植入颗数，使得在不影响怀孕率為前提的考量下，也限制了多胞胎的发生率。
从D3发展至D5植入的过程中，既然有优点，相对风险的存在也是伴随而来。胚胎之间的优胜劣败在拉长战线后的逐渐明朗化，怀孕率依然在我们预期值内，且植入较少颗数...等都是我们耳熟能详的优点，但从另一个角度来看，囊胚期培养的失败以至未植入的个案增加，胚胎品质下降 等，也都是同时要承担的风险。
| D3（8细胞） | D4（緻密化-桑椹期） | D5（囊胚期3AA） | |
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过去几年，纽约St.Luke's Roosevelt Hospital Center胚胎植入时间大部分是在取卵后第四天（取卵日算D0），选择此做法的原因是依照正常生殖生理的过程。Tao et al.回溯有关D3&D4植入的结果，发现胚胎在緻密化（Compaction）到桑椹期（Morula）的呈现已能提供我们做出较明确选择，也明显让植入的胚胎数降低。
接著便分享来自St.Luke's Roosevelt Hospital Center-D4胚胎植入的成绩，同时也一併讨论有关降低多胞胎机率，辅助孵化的进行，以及PGD（植入前基因诊断）。
材料收集＆研究方法
资料的收集是回溯2003.1-2003.12，纽约St.Luke's Roosevelt Hospital Center
进行的试管婴儿施术个案，无设定特殊条件，最后采用200个施数週期，并且都是采用自己卵子且非使用解冻胚胎的结果。当中包含各种难孕原因，涵盖各年龄层，且不受限于滤泡数及受精卵数多寡，但当FSH血中浓度>15，就不列入此次收集的个案。排卵针的使用，打针期间的追踪以及取卵时机等皆為目前常用的方法。
在St.Luke's Roosevelt Hospital Center对胚胎进行辅助孵化的比率将近有80%。胚胎的碎片若>10%，就会进行碎片移除，而移除碎片或做辅助孵化的时机是当胚胎分裂到6-8细胞（D3）的时候，接著继续培养到D4进行胚胎植入。植入后第12&14天抽血验怀孕指数，而第19-20天经由阴道超音波确认是否有胚囊。
结果
- 平均年龄在38.4岁，取得卵数平均為8.37，而受精卵平均有6.51颗，最后植入平均颗数是3.05。
- 依照年龄层作结果的分析，年轻族群有较高的著床率，35-40岁之间的著床率相当。
- 40岁以下的怀孕率及活产率都相当；小于40岁则多胞胎机率较高。
讨论
延长的培养天数使我们能观察到，在胚胎越过基因活化的时间点，细胞分裂过程裡可能出现的发育过慢或停滞现象，都赤裸裸地呈现出来。虽然这个研究的结果，怀孕率&著床率&活产率都比SART资料库所呈现的来的高；植入的胚胎数就不同年龄层来看，与SART的资料相近；双胞胎及三胞胎的机率分别是27.5% & 1.8%（在美国為32% & 3.8%）。由于SART的资料来源并没有针对植入天数做区分，所以这样的比较显得较不客观。
延长培养天数对怀孕率所带来的正向帮助是否在每一个年龄层皆出现？部分研究的结果发现这样的情形其实只出现在某特定族群，并非适用于全部个案。不过就这一篇的结果来看，与部分研究认為的"非特定族群"较為接近。
第四天的胚胎发育到緻密化（Compaction）-桑椹胚（Morula）阶段，这一时期细胞团也因緻密化使得PVS（Perivitelline space）的空间增加（胚胎与透明带内层的空间间隔），似乎也是进行辅助孵化术（AHa）的好时机。囊胚期培养的过程宛如一场淘汰赛，部分基因异常的胚胎在这过程裡会自行出局，但是有37%的胚胎虽属异常，仍能继发展形成囊胚期。PGD的结果能在植入前出炉，提供了更多讯息让植入异常胚胎的机会降低，但是过程中可能对胚胎造成伤害也是值得注意。
从这篇研究看到在D4植入的成绩，但没有针对个案条件做区分，未来需要再拟定一个更严谨的前瞻性的研究，继续发掘延长培养的实用价值。
补充
送子鸟目前全面采D5囊胚期胚胎植入，仅部分客户会落在D3 & D4植入。根据本院怀孕结果统计，在D4 & D5的怀孕率相当（约50%），甚至高于D3植入的族群。客户有时会问起D4植入会不会导致怀孕率下降？依本院目前结果来看，并不受影响，故遇D4植入的客户们大可放心。
